北京Klenow片段(无外切酶活性)现货供应

名称：北京Klenow片段(无外切酶活性)现货供应
品Pai：百奥莱博
编号：YT510
产地：国产|进口
本酶是没有外切酶活性的Klenow片段，是大肠杆菌聚合酶I(E.coli.DNA polymerase I)的大片段(Large Fragment)缺失了外切酶活性的突变体。Klenow Fragment，Exo-保留了DNA聚合酶I的5＇→3＇聚合酶活性，但缺少完整的Klenow酶的5＇→3＇和3＇→5＇外切酶活性。

特点：由于Klenow Fragment，Exo-没有外切酶活性，其在末端补平时经常会在3＇末端额外加上1个或多个核苷酸，因此不能用于产生平末端而用于后续的连接。
用途：5＇突出末端的标记；随机引物法进行DNA标记；Sanger双脱氧法进行DNA测序等。
来源：由大肠杆菌表达，表达基因的来源为突变的 polA 基因片段。
分子量：约68kDa(单体)。
活性定义：37℃30分钟内，催化10nmol脱氧核糖核苷酸(dNTPs)摻入到多聚核苷酸中所需的酶量定义为1个活性单位。
酶活性检测条件：67mM potassium phosphate(pH7.4)，6.7mM MgCl2，1mM 2-mercaptoethanol，0.033mM dATP，0.033mM dTTP，0.4MBq/ml[3H]-dTTP，62.5μg/ml poly(dA-dT)·poly(dA-dT)。
纯度：不含DNA内切酶，不含RNase。
酶储存溶液：25mM Tris-HCl(pH7.5)，0.1mM EDTA，1mM DTT，50%(v/v)glycerol。
Reaction Buffer(10X)：500mM Tris-HCl(pH8.0 at 25℃)，50mM MgCl2， 10mM DTT。
失活或YZ：75℃加热10分钟或加入适量EDTA均可导致Klenow Fragment，Exo-失活。金属离子螯合剂，无机焦磷酸盐(PPi)，大剂量的无机磷酸盐(Pi)均对Klenow Fragment，Exo-有YZ作用。
储存条件：-20℃。

使用说明：

1. 随机引物法进行DNA标记：
a. 参考如下表格设置反应体系：
DNA———————————————————————————————10µl(100ng)
Reaction Buffer (10X)——————————————————————5µl
125µM random decamer or hexamer primer——————————————10µl
补充无核酸酶的去离子水——————————————————————至40μl
混匀后沸水浴孵育5-10分钟，立即置于冰浴冷却。进行后续步骤前离心沉淀液
3 dNTP Mixture (0.25mM each , without the labeled—————————4μl
[α-32P]-dNTP, ~110 TBq/mmol (3000Ci/mmol)————————————1.85MBq (50μCi)
Klenow Fragment，Exo-———————————————————————1µl (5U)
补充无核酸酶的去离子水———————————————————————至50µl
b. 按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex在速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
c. 对于random decamer primer，37℃孵育5分钟；对于random hexamer primer，37℃孵育10分钟。
d. 加入4μl 0.25mM dNTP，混匀后37℃孵育5分钟。
e. 加入1μl 0.5M EDTA，pH8.0终止反应。
f. 取1μl上述液体用于检测标记的效率。
g. 用Sephadex G-50或Bio-Gel P-60或其它适当试剂盒纯化标记好的探针。

2. 双链DNA 5’突出(5’ overhang)末端的标记：
a. 参考如下表格设置反应体系：
Digested DNA ——————————————————————————10~15µl(0.1~4μg)
Reaction Buffer (10X)——————————————————————2µl
[α-32P]-dNTP, ~15-30 TBq/mmol(400-800Ci/mmol) —————————0.74 MBq(20μCi)
或 [α-32P]-dNTP, ~110 TBq/mmol(3000Ci/mmol)———————————2.96 MBq(80μCi)
3 dNTP Mixture (2.5mM each , without the labeled）————————2μl
Klenow Fragment，Exo-———————————————————————0.2μl (1U)
补充无核酸酶的去离子水———————————————————————至20µl
b. 按上述体系配好之后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex在速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
c. 30℃孵育15分钟。
d. 75℃孵育10分钟终止反应。

3. 其他用途可以参考上述用途或适当的文献资料进行。

北京Klenow片段(无外切酶活性)现货供应正在火爆，除此之外，为您推荐下别产品：

·N-乙酰氨基葡萄糖转移酶
编号：YT559
英文名称：N-Acetylglucosaminyltransferases (Crude Enzyme)
规格：100ml|1L
本酶为大肠杆菌表达的N-乙酰氨基葡萄糖转移酶，并经简单纯化获得的可以确保达到一定酶活力的粗酶液，用于催化转移N-乙酰氨基葡萄糖，参与天冬酰胺连接型(N-)或丝氨酸/苏氨酸连接型(O-)聚糖的合成加工。

CAS：83588-90-3
外观：半透明黄色溶液
酶促反应：UDP-N-acetyl-D-glucosamine + 6-(2-[N-acetyl-β-D-glucosaminyl]-α-D-mannosyl)-β-D-mannosyl-R = UDP + 6-(2,6-bis[N-acetyl-β-D-glucosaminyl]-α-D-mannosyl)-β-D-mannosyl-R
储存条件：-20℃，有效期1个月。

注意事项：
1. 由于本产品需新鲜制备，在您确认订购后约8个工作日才能发货。
2. 粗酶液的每次冻融均可能会引起部分失活，所以收到酶液后请根据需要进行分装，并置于-20℃或更低温度保存。
3. 随着保存时间的延长，酶活力会有一定程度的下降，收到产品后应尽快使用。
4. 本产品在生产和保存的过程中可能会有混浊或沉淀产生，融化后混匀即可，不影响正常使用。

·小鼠抗CD44抗体
编号：YT699
英文名称：CD44 Mouse Monoclonal Antibody
规格：50μl
本品为来源于小鼠的抗CD44的单克隆抗体。
宿主：小鼠
克隆性：单克隆抗体
用途：WB,FCM,IHC
交叉反应性：人
分子量：80KDa
推荐稀释比例：WB(1:500-1:1000),IHC(1:200),FCM(1:100-1:200)

About this Antibody
Name	CD44 Mouse Monoclonal Antibody
Category	Monoclonal antibody(mAb); Primary antibody
Isotype	IgM
Purification	ProA affinity purified
About the Immunogen
Immunogen	This antibody is produced by immunizing mice with a synthetic peptide (KLH-coupled) corresponding to a region of CD44.
Gene ID	960
SwissProt	P16070
Synonyms	CDW44; CSPG8; ECMR-III; HCELL; IN; LHR; MC56; MDU2; MDU3; MGYT1778; MIC4; MUTCH-I; Pgp1
Category	Immunology ａnd Inflammation
Background	CD44 is a cell-surface glycoprotein postulated to play a role in a variety of biological processes, including lymphocyte homing ａnd tumor-cell metastasis. It mediates cell-cell ａnd cell-matrix interactions through its affinity for hyaluronic acid (HA), ａnd possibly also through its affinity for other ligands such as osteopontin,collagens, ａnd matrix metalloproteinases (MMPs). Adhesion with HA plays an important role in cell migration, tumor growth ａnd progression. CD44 is highly polymorphic, possesses a number of alternative splice variants ａnd undergoes extensive post-translational modifications.

注意事项：
1. 如果本抗体用于Western blot (WB)、免疫荧光(IF)、免疫细胞化学(ICC)等实验，请注意回收使用过的稀释抗体。回收的抗体通常至少可以重复使用5-10次。稀释后的抗体，包括已经使用过的稀释抗体，请4℃保存。
2. 回收后重复使用的抗体，使用方法同新鲜稀释的抗体。如果在重复使用过程中发现抗体出现轻微混浊现象，可以10,000g离心1-3分钟，取上清用于后续检测。如果回收的抗体出现明显的絮状物或长霉长菌等情况，则可以考虑废弃该抗体。
3. 提供的Western一抗稀释液也可以用于免疫荧光(IF)、免疫组化(IHC)、免疫细胞化学(ICC)等适当用途。如果希望获得的检测效果，请考虑使用上述检测专用的一抗稀释液。

储存条件：-20℃，有效期一年。


北京Klenow片段(无外切酶活性)现货供应